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缺氧探针--Pacific Blue提供强烈的免疫染色，且背景非常低

上一篇 / 下一篇 2024-10-21 16:03:53/ 个人分类：生化试剂

Hypoxyprobe?-1 Pacific Blue Kit 组件详细说明：

Hypoxyprobe?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为盐酸匹莫噻唑，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116 mg/ml）；在324 nm处的紫外吸收（在0.9%盐水中的消光系数为7020）。自由碱形式的匹莫噻唑分子量为254.3，pKa为8.7，辛醇-水分配系数为8.5。有关Hypoxyprobe?-1的作用机制、常见问题（FAQ）和应用，请参见www.hypoxyprobe.com。固体Hypoxyprobe?-1在低光照条件下的室温存储两年，并在4°C下以0.9%盐水（100 g/liter）存放4.5年，没有检测到降解（UV和HPLC分析）。匹莫噻唑在缺氧细胞中被还原活化，并与含硫（巯基）基团形成稳定的加合物，这些基团存在于蛋白质、肽和氨基酸中。太平洋蓝染料-MAb1与这些加合物结合，允许通过免疫化学手段检测它们。

Pacific Blue-MAb1是一种染料结合的大鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆4.3.11.3），以0.5 mg/ml的浓度提供，溶于含1% BSA和0.09%叠氮化钠作为稳定剂的PBS中。感兴趣的组织可以通过免疫组化在冷冻固定切片或福尔马林固定石蜡包埋切片上研究，或者在组织解离后进行流式细胞术。注意：太平洋蓝染料-MAb1与匹莫噻唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在免疫组化过程中，组织处理会冲洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫组化缺氧检测依赖于缺氧组织中匹莫噻唑的蛋白质加合物。

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艾美捷Pacific Blue：

货号：HPB-Pacific Blue

应用：免疫化学检测细胞和组织缺氧，包括免疫荧光、免疫过氧化酶法或流式细胞术。该Hypoxyprobe?-1 Pacific Blue试剂盒在福尔马林固定的石蜡包埋大鼠肿瘤组织中提供强烈的免疫染色，并且背景非常低。

规格：

a. Hypoxyprobe?-1 Pacific Blue试剂盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（匹莫噻唑盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为60 mg/kg体重。

b. 一小瓶（100 mg和200 mg试剂盒）或两小瓶（1000 mg试剂盒）含有200微升稀释的Pacific Blue染料结合的IgG1大鼠单克隆抗体（克隆11.23.22.R）。每小瓶包含200微升0.50 mg/ml的Pacific Blue染料-MAb1溶液，稀释液为含1% BSA和0.09%叠氮化钠的PBS。Pacific Blue染料-MAb1的最佳稀释度需由研究人员确定，但发现1:50-100的稀释度能在大鼠肿瘤组织中产生强烈的免疫荧光染色。Pacific Blue染料-MAb1专为免疫荧光设计，能够在荧光显微镜下或用于流式细胞术和Western Blotting应用中观察。免疫荧光中的抗体稀释度通常低于免疫过氧化酶检测系统中使用的稀释度。

不提供：

用于免疫组化分析的标准试剂。

存储：

a. 将Hypoxyprobe?-1固体存放在室温下避光保存（也可在2-8摄氏度下避光存放）。

b. 将Pacific Blue染料-MAb存放在2-8摄氏度避光保存。切勿冷冻。

Hypoxyprobe?-1 Pacific Blue Kit检测说明：

对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉注射、腹腔注射或口服摄入Hypoxyprobe?-1（盐酸匹莫噻唑）溶液，剂量为60 mg/kg体重。对于25克的大鼠，这相当于1.5 mg/大鼠。在小鼠中，最高剂量可达400 mg/kg而无可检测的毒性或组织缺氧变化，但60 mg/kg在成本最小的情况下能够提供良好的免疫染色。Hypoxyprobe?-1在盐水中的溶解度为116 mg/ml，因此可使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe?-1。注射或摄入后，Hypoxyprobe?-1分布到所有组织，包括大脑，但仅在氧浓度低于14微摩尔的细胞中与含硫的蛋白质形成加合物——相当于37°C下的部分压力pO2 = 10 mm Hg。除了肿瘤，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤中也存在pO2 = 10 mmHg或更低的细胞，这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。Hypoxyprobe?-1在小鼠中的血浆半衰期约为25分钟（有关参考文献，请参见www.hypoxyprobe.com的FAQ链接）。相比之下， rats的血浆半衰期为45分钟，犬为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的大鼠组织可在施用Hypoxyprobe?-1后60分钟或更长时间进行采集。在采集时，组织内的Hypoxyprobe?-1将在组织缺氧时结合，但与60分钟或更长实验期间组织暴露的Hypoxyprobe?-1量相比，残留的Hypoxyprobe?-1量非常小，因此任何由于残留Hypoxyprobe?-1引起的非特异性结合都是不可检测的。